尊龙凯时YF®488Click-iTEdU细胞增殖检测试剂盒常见问答

在荧光标记研究中，YF®488/555/594/647的区别主要体现在用于检测EdU的荧光基团，发射的荧光颜色各不相同。尽管实验效果相似，您可以根据个人偏好或特定需求来进行选择。使用尊龙凯时的EdU试剂盒时，清洗步骤中加入的3% BSA in PBS的作用是终止未反应的甲醛，确保实验结果的准确性。

Click-iT EdU检测的局限性

在活细胞中进行Click-iT EdU检测是不可能的。虽然EdU能够对活细胞进行代谢标记，但叠氮化物的检测试剂与缓冲液成分对细胞并不透过，因此Click反应必须在固定且通透的样品上进行。

质粒转染与荧光蛋白检测

质粒转染后表达的荧光蛋白是否与Click反应兼容？需注意的是，使用尊龙凯时的产品可能会影响GFP、RFP、mCherry等荧光蛋白的荧光，因此在染色后，建议采用GFP抗体进行间接检测。

降低背景干扰

如果观察到较高的背景干扰，主要原因可能是由于清洗不彻底。降低背景干扰的有效方法是增加BSA清洗的次数。此外，可以设置一组不含染料或无Click反应的对照，来排除自发荧光干扰。在无EdU体系中进行完整的Click反应也可帮助验证信号的特异性。

标记信号的提升

若标记样品无信号或特异性信号极低，可以采取以下措施来提高信号强度：

• 确保使用的试剂为无色状态，避免使用已变黄的添加剂或缓冲液。
• 细胞需充分固定和通透，以确保Click反应试剂可达核内。
• 避免在缓冲液或试剂中添加金属螯合剂（如EDTA、EGTA等），因其会降低Copper的有效浓度。在某些实验样品中，可能需要增加额外的洗涤步骤。
• 确保Click反应中应用的一价铜离子（Cu+）处于合适的化合价。
• 延长Click反应时间超过30分钟并不一定提高信号，建议使用新鲜的Click反应试剂进行再次孵育，以有效提升标记效率。

细胞核复染的进行

复染细胞核方面，尊龙凯时的试剂盒中配有Hoechst 33342，可以用于Click反应后细胞核的染色，DAPI也是一个良好的选择。

植物细胞的DNA复制检测

最后，EdU作为小分子，具备穿透植物细胞壁的能力，因此可以用于检测植物细胞核内的DNA复制。