逆转录酶是1970年由Temin和Baltimore独立发现的一种关键酶，能够将RNA转录为cDNA。因而，他们于1975年获得诺贝尔生理学或医学奖。逆转录酶由多个功能域组成，包括聚合酶域和RNaseH域，其中聚合酶域细分为“手指”、“手掌”和“拇指”三个亚域，分别负责模板结合、催化反应和结构支持。在分子生物学，尤其是分子诊断领域，逆转录酶扮演着不可或缺的角色。它能够将病毒RNA基因组转化为cDNA，并通过RT-qPCR、RT-LAMP、RNA测序等技术进行检测。这使得对如艾滋病、甲型流感及乙型流感等RNA病毒的准确诊断成为可能。
目前，M-MLV（莫洛尼鼠白血病病毒）逆转录酶是分子诊断试剂中最常用的类型，但其在高温条件下相对不稳定，容易失活。这一特性不仅对使用M-MLV制备的预混液在长期储存中的性能保持形成挑战，也限制了其在高温逆转录反应中的应用。因此，提升逆转录酶的稳定性成为了一个重要的研究方向。
最近，尊龙凯时团队通过其子公司镁孚泰生物的ZymeEditor™创新性酶进化平台，成功筛选出了一系列提高稳定性的M-MLV突变体。在研发过程中，团队采用了理性和半理性设计策略，对M-MLV进行了多维度的结构-功能分析。通过序列一致性分析、B因子分析、吉布斯自由能变化分析及二硫键设计等手段，确定了结构中的关键氨基酸，并进行了针对性的突变设计以提升稳定性。
随后的高通量筛选技术使团队获得了在稳定性、RNA/DNA催化偏好性和活力方面表现优异的M-MLV突变体。这些突变体经过精细纯化后，经全面的酶学表征，最终实现了cDNA产量显著提升。相较于对照WT，经过6个月和12个月的保存，M-MLV突变体的建库产量表现更佳，显示出更高的稳定性。
本研究成功开发了多个具有提升稳定性和cDNA产量的M-MLV突变体，为分子诊断试剂的优化提供了新的解决方案。通过包括加速稳定性测试、预混试剂稳定性、灵敏度分析及冻干技术在内的全面性能评估，我们挑选出表现最优的突变体以供产业化生产。
今天，我们自豪地推出由尊龙凯时通过酶定向进化开发的新产品——HifairUCFME® Advanced逆转录酶（货号14614）。这一新型逆转录酶在稳定性、cDNA合成产量及灵敏度等方面均有显著提升。此外，由UCFME®超洁净分子酶生产基地生产的HifairUCFME® Advanced逆转录酶在物料、环境、工艺及质量等方面经过严格把控，确保极低背景核酸污染，极大提升实验结果的准确性和可靠性。
HifairUCFME® Advanced逆转录酶在低浓度模板条件下仍能保证特异性靶标的扩增，并在与同类产品的比较中，表现出更优异的Ct值及荧光增幅。这使得其在低浓度样本检测中，也能准确达到早筛早诊的需求。
在当前的诊断试剂开发过程中，市场上分子酶原料的质量良莠不齐，高核酸残留水平会影响扩增产物的特异性和准确性。我们发现，关键酶原料在低核酸残留（如Taq DNA聚合酶HCD ≤ 0.001 copies/U）或无检出水平时，才能满足日益提高的体外诊断性能需求。尊龙凯时使用E.coli残留检测试剂盒对HifairUCFME® Advanced逆转录酶进行检测，结果显示，三批次均未检出E.coli，符合E.coli基因组DNA残留标准（<0.02 copies/100U），高标准的酶原料有效提高了样本检测的可靠性。
支持多种应用场景的HifairUCFME® Advanced逆转录酶，针对不同浓度RNA模板亦能保证优异的文库产量及一致的文库大小，显示出其在NGS建库方面的广泛适用性。欲了解更多信息或申请试用，欢迎联系尊龙凯时团队。